Любимое и последнее детище Леонардо да Винчи, которое он совершенствовал двадцать лет до самой смерти, это картина «Богородица с младенцем и святой Анной». Холст является частью экспозиции Лувра. По одной из версий происхождения он был заказан Людовиком XII для своей беременной жены Анны Бретонской, так как святая Анна была покровительницей новобрачных и беременных. Но работа так и не была закончена, много мест не доработаны, и она до конца дней автора оставалась в его мастерской.

Леонардо да Винчи начал работу над композицией в 1500 году и до 1519 постоянно с ней работал, пересматривая сюжет, добавляя новые детали. Изображение весьма символично, именно поэтому художник потратил столько времени на доработку. Суть в том, что сюжет картины запечатлел тот момент, в который Богородица узнает и принимает будущую тяжёлую судьбу своего сына. Сама Богородица сидит на руках своей матери святой Анны, олицетворяя связь поколений, а маленький Иисус обнимает ягненка, как символ своих будущих страданий, воплощающий жертвенное животное.

Здесь реализован весь талант великого мастера в изображении чувств. Сам Иисус, озорно улыбаясь, смотрит на мать и бабушку с вопросом, понимают ли они, что будет дальше. Причем бабушка знает и понимает, что его смерть является искуплением для всего мира. Святая Анна с заботой и восторгом наблюдает за своими наследниками.

На лице матери видна двусмысленность: с одной стороны, она как человек переживает за своего сына, желая защитить его, забрать от будущей судьбы, что проявляется на физическом плане, но, с другой стороны, она улыбается, душой понимая необходимость отпустить его. Поэтому Мария с любовью и заботой тянет руки к сыну, то ли пытаясь обнять его, то ли выпуская.

Вся картина отображает мир в достаточно ярких и радостных красках. При определенной доле меланхолии на лицах счастливые и удовлетворённые жизнью улыбки. Весь сюжет как-бы в движении.

Пейзаж создан с идеальным учётом перспективы, создавая у зрителя четкое ощущение наблюдения со стороны. Все элементы намекают на спокойствие, стабильность и надежду. В то же время между скалами можно увидеть потоки воды, что символизирует путь Христа, усеянный подводными камнями.

Мелкому восстановлению по фрагментам картина подвергалась и ранее, но в 2011-2012 годах была проведена реставрация, которая, как считают некоторые специалисты, нанесла значительный урон картине. Два члена комиссии даже вышли из ее состава в знак протеста. В результате очистки и обработки холст приобрел слишком яркие, если не сказать кислотные оттенки красок, что нетипично для Леонардо да Винчи. Многие считают, что реставрацию нужно было проводить менее кардинально.